Implementación de un control interno en la detección molecular de las principales especies de micoplasmas contaminantes de cultivos celulares

Objetivo: Construir e implementar un control interno para la detección molecular de micoplasmas en cultivos celulares. Materiales y métodos: Se alinearon secuencias del RNA ribosomal 16S de las princi- pales especies de micoplasmas reportadas como contaminantes de cultivos, y diseñaron oligonucleóti...

Descripción completa

Guardado en:

Detalles Bibliográficos
Autores principales:	Juan D. Puerta, José A. Usme-Ciro, Juan C. Gallego-Gómez
Formato:	article
Lenguaje:	EN ES
Publicado:	Universidad del Norte 2013
Materias:	detección molecular pcr control interno micoplasma contami nación cultivos celulares Medicine R Nursing RT1-120 Public aspects of medicine RA1-1270
Acceso en línea:	https://doaj.org/article/d14b6b7b7b7c40e0942cb0afb0020c19
Etiquetas:	Agregar Etiqueta Sin Etiquetas, Sea el primero en etiquetar este registro!

id	oai:doaj.org-article:d14b6b7b7b7c40e0942cb0afb0020c19
record_format	dspace
spelling	oai:doaj.org-article:d14b6b7b7b7c40e0942cb0afb0020c192021-12-02T18:12:13ZImplementación de un control interno en la detección molecular de las principales especies de micoplasmas contaminantes de cultivos celulares0120-55522011-7531https://doaj.org/article/d14b6b7b7b7c40e0942cb0afb0020c192013-01-01T00:00:00Zhttp://www.redalyc.org/articulo.oa?id=81730430003https://doaj.org/toc/0120-5552https://doaj.org/toc/2011-7531Objetivo: Construir e implementar un control interno para la detección molecular de micoplasmas en cultivos celulares. Materiales y métodos: Se alinearon secuencias del RNA ribosomal 16S de las princi- pales especies de micoplasmas reportadas como contaminantes de cultivos, y diseñaron oligonucleótidos para la detección de las mismas. Para la construcción del control interno se amplificó una secuencia espaciadora, además de las secuencias de hibridación de los oligonucleótidos usados para detección. La amplificación desde dicho control generó un fragmento con tamaño diferente al obtenido desde una muestra positiva. Posteriormente, para la evaluación del efecto del control interno sobre la amplificación de una muestra po- sitiva se realizó la prueba sobre diluciones seriadas de la muestra, en presencia y ausencia del control interno. Finalmente, se ensayó el protocolo utilizando sobrenadantes de cultivo provenientes de diferentes laboratorios. Resultados: Se observó alta homogeneidad al comparar los géneros Mycoplasma y Acho- leplasma; no obstante se realizó el diseño de oligonucleótidos degenerados para aumentar teóricamente la eficiencia en la detección de todas las especies. Se demostró que la aplica- ción del control interno no afecta la sensibilidad de detección de la prueba. Los resultados obtenidos con muestras problema resaltan la importancia del control interno al realizar la prueba desde sobrenadantes de cultivo. Conclusiones: El uso del control interno evita la obtención de resultados falsos negativos, generados por presencia de inhibidores en la muestra. La implementación de la prueba beneficiará los laboratorios en cuyas investigaciones utilicen cultivos celulares y permitirá ejercer un control de calidad, lo cual hará más confiables los resultados/productos obteni- dos. Palabras clave: Detección molecular, PCR, control interno, micoplasma, contami- nación, cultivos celulares.Juan D. PuertaJosé A. Usme-CiroJuan C. Gallego-GómezUniversidad del Nortearticledetección molecularpcrcontrol internomicoplasmacontaminacióncultivos celularesMedicineRNursingRT1-120Public aspects of medicineRA1-1270ENESSalud Uninorte, Vol 29, Iss 2, Pp 160-173 (2013)
institution	DOAJ
collection	DOAJ
language	EN ES
topic	detección molecular pcr control interno micoplasma contami nación cultivos celulares Medicine R Nursing RT1-120 Public aspects of medicine RA1-1270
spellingShingle	detección molecular pcr control interno micoplasma contami nación cultivos celulares Medicine R Nursing RT1-120 Public aspects of medicine RA1-1270 Juan D. Puerta José A. Usme-Ciro Juan C. Gallego-Gómez Implementación de un control interno en la detección molecular de las principales especies de micoplasmas contaminantes de cultivos celulares
description	Objetivo: Construir e implementar un control interno para la detección molecular de micoplasmas en cultivos celulares. Materiales y métodos: Se alinearon secuencias del RNA ribosomal 16S de las princi- pales especies de micoplasmas reportadas como contaminantes de cultivos, y diseñaron oligonucleótidos para la detección de las mismas. Para la construcción del control interno se amplificó una secuencia espaciadora, además de las secuencias de hibridación de los oligonucleótidos usados para detección. La amplificación desde dicho control generó un fragmento con tamaño diferente al obtenido desde una muestra positiva. Posteriormente, para la evaluación del efecto del control interno sobre la amplificación de una muestra po- sitiva se realizó la prueba sobre diluciones seriadas de la muestra, en presencia y ausencia del control interno. Finalmente, se ensayó el protocolo utilizando sobrenadantes de cultivo provenientes de diferentes laboratorios. Resultados: Se observó alta homogeneidad al comparar los géneros Mycoplasma y Acho- leplasma; no obstante se realizó el diseño de oligonucleótidos degenerados para aumentar teóricamente la eficiencia en la detección de todas las especies. Se demostró que la aplica- ción del control interno no afecta la sensibilidad de detección de la prueba. Los resultados obtenidos con muestras problema resaltan la importancia del control interno al realizar la prueba desde sobrenadantes de cultivo. Conclusiones: El uso del control interno evita la obtención de resultados falsos negativos, generados por presencia de inhibidores en la muestra. La implementación de la prueba beneficiará los laboratorios en cuyas investigaciones utilicen cultivos celulares y permitirá ejercer un control de calidad, lo cual hará más confiables los resultados/productos obteni- dos. Palabras clave: Detección molecular, PCR, control interno, micoplasma, contami- nación, cultivos celulares.
format	article
author	Juan D. Puerta José A. Usme-Ciro Juan C. Gallego-Gómez
author_facet	Juan D. Puerta José A. Usme-Ciro Juan C. Gallego-Gómez
author_sort	Juan D. Puerta
title	Implementación de un control interno en la detección molecular de las principales especies de micoplasmas contaminantes de cultivos celulares
title_short	Implementación de un control interno en la detección molecular de las principales especies de micoplasmas contaminantes de cultivos celulares
title_full	Implementación de un control interno en la detección molecular de las principales especies de micoplasmas contaminantes de cultivos celulares
title_fullStr	Implementación de un control interno en la detección molecular de las principales especies de micoplasmas contaminantes de cultivos celulares
title_full_unstemmed	Implementación de un control interno en la detección molecular de las principales especies de micoplasmas contaminantes de cultivos celulares
title_sort	implementación de un control interno en la detección molecular de las principales especies de micoplasmas contaminantes de cultivos celulares
publisher	Universidad del Norte
publishDate	2013
url	https://doaj.org/article/d14b6b7b7b7c40e0942cb0afb0020c19
work_keys_str_mv	AT juandpuerta implementaciondeuncontrolinternoenladeteccionmoleculardelasprincipalesespeciesdemicoplasmascontaminantesdecultivoscelulares AT joseausmeciro implementaciondeuncontrolinternoenladeteccionmoleculardelasprincipalesespeciesdemicoplasmascontaminantesdecultivoscelulares AT juancgallegogomez implementaciondeuncontrolinternoenladeteccionmoleculardelasprincipalesespeciesdemicoplasmascontaminantesdecultivoscelulares
_version_	1718378538131783680

Implementación de un control interno en la detección molecular de las principales especies de micoplasmas contaminantes de cultivos celulares

Ejemplares similares