Evaluación diagnóstica de fracciones cromatográficas de Fasciola hepatica mediante Western Blot y ELISA en animales infectados

Evaluación diagnóstica de fracciones cromatográficas de Fasciola hepatica mediante Western Blot y ELISA en animales infectados

La fasciolosis causada por Fasciola hepatica se diagnostica rutinariamente mediante el examen coprológico. Debido a que este examen no es 100% sensible y además es ineficaz en la etapa pre-patente, se realizó este trabajo con el objeto de caracterizar y seleccionar fracciones antigénicas de valor di...

Descripción completa

Guardado en:
Detalles Bibliográficos
Autores principales: FREDES,F., GORMAN,T., SILVA,M., ALCAINO,H.
Lenguaje:Spanish / Castilian
Publicado: Facultad de Ciencias Veterinarias, Universidad Austral de Chile 1997
Materias:
fasciolosis
diagnóstico
SDS-PAGE
Western Blot
ELISA
Acceso en línea:http://www.scielo.cl/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S0301-732X1997000200014
Etiquetas: Agregar Etiqueta
Sin Etiquetas, Sea el primero en etiquetar este registro!
id oai:scielo:S0301-732X1997000200014
record_format dspace
spelling oai:scielo:S0301-732X19970002000142000-06-02Evaluación diagnóstica de fracciones cromatográficas de Fasciola hepatica mediante Western Blot y ELISA en animales infectadosFREDES,F.GORMAN,T.SILVA,M.ALCAINO,H. fasciolosis diagnóstico SDS-PAGE Western Blot ELISA La fasciolosis causada por Fasciola hepatica se diagnostica rutinariamente mediante el examen coprológico. Debido a que este examen no es 100% sensible y además es ineficaz en la etapa pre-patente, se realizó este trabajo con el objeto de caracterizar y seleccionar fracciones antigénicas de valor diagnóstico de extractos de excreción-secreción del parásito. Se utilizó cromatografía de exclusión por tamaño molecular (Sephacryl S-300), electroforesis en geles de poliacrilamida en ambiente reductor (SDS-PAGE) y posterior western blot (WB), además de un método de "enzyme-linked immuno-sor-bent assay" (ELISA) en microplaca. Para evaluar el valor diagnóstico de los antígenos se usaron sueros de las especies ovina, porcina y equina en tres estados (sanos, con otras parasitosis y naturalmente infectados con F. hepatica). Mediante el método cromatográfico se obtuvieron hasta 5 "peaks", que interpolados en una curva patrón representaron polipéptidos de pesos aproximados de 2.000, 400, 150, 29 y menores a 29 kDa. De éstos, los inmunorreactivos específicos para la enfermedad en las tres especies animales, bajo los criterios de SDS-PAGE y posterior WB, fueron los de 400, 150, 29 y <29. La evaluación mediante ELISA en microplaca, de estas fracciones con los sueros de las tres especies animales infectadas, indicó que la fracción de 29 kDa ofreció valores de sensibilidad y especificidad de 94.5% y 93.5%, respectivamente. Similares valores de sensibilidad y especificidad se determinaron al enfrentar esta fracción antigénica con sueros de ovinos en la etapa prepatente de la infección. Esta misma fracción analizada por el criterio de SDS-PAGE y luego por WB dio dos bandas de reconocimiento específico, una de 29 kDa y otra de 14 kDa aproximados. Con estos resultados concluimos que la fracción cromatográfica de 29 kDa sería capaz de discriminar en las especies ovina, porcina y equina, entre aquellos animales sanos, con otras parasitosis y con fasciolosis. Además fue también eficiente para diagnosticar la infección en etapa prepatente en ovinos. Por ello se constituye en una fracción promisoria para ser purificada y empleada en estudios epidemiológicos mediante ELISAinfo:eu-repo/semantics/openAccessFacultad de Ciencias Veterinarias, Universidad Austral de ChileArchivos de medicina veterinaria v.29 n.2 19971997-01-01text/htmlhttp://www.scielo.cl/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S0301-732X1997000200014es10.4067/S0301-732X1997000200014
institution Scielo Chile
collection Scielo Chile
language Spanish / Castilian
topic fasciolosis
diagnóstico
SDS-PAGE
Western Blot
ELISA
spellingShingle fasciolosis
diagnóstico
SDS-PAGE
Western Blot
ELISA
FREDES,F.
GORMAN,T.
SILVA,M.
ALCAINO,H.
Evaluación diagnóstica de fracciones cromatográficas de Fasciola hepatica mediante Western Blot y ELISA en animales infectados
description La fasciolosis causada por Fasciola hepatica se diagnostica rutinariamente mediante el examen coprológico. Debido a que este examen no es 100% sensible y además es ineficaz en la etapa pre-patente, se realizó este trabajo con el objeto de caracterizar y seleccionar fracciones antigénicas de valor diagnóstico de extractos de excreción-secreción del parásito. Se utilizó cromatografía de exclusión por tamaño molecular (Sephacryl S-300), electroforesis en geles de poliacrilamida en ambiente reductor (SDS-PAGE) y posterior western blot (WB), además de un método de "enzyme-linked immuno-sor-bent assay" (ELISA) en microplaca. Para evaluar el valor diagnóstico de los antígenos se usaron sueros de las especies ovina, porcina y equina en tres estados (sanos, con otras parasitosis y naturalmente infectados con F. hepatica). Mediante el método cromatográfico se obtuvieron hasta 5 "peaks", que interpolados en una curva patrón representaron polipéptidos de pesos aproximados de 2.000, 400, 150, 29 y menores a 29 kDa. De éstos, los inmunorreactivos específicos para la enfermedad en las tres especies animales, bajo los criterios de SDS-PAGE y posterior WB, fueron los de 400, 150, 29 y <29. La evaluación mediante ELISA en microplaca, de estas fracciones con los sueros de las tres especies animales infectadas, indicó que la fracción de 29 kDa ofreció valores de sensibilidad y especificidad de 94.5% y 93.5%, respectivamente. Similares valores de sensibilidad y especificidad se determinaron al enfrentar esta fracción antigénica con sueros de ovinos en la etapa prepatente de la infección. Esta misma fracción analizada por el criterio de SDS-PAGE y luego por WB dio dos bandas de reconocimiento específico, una de 29 kDa y otra de 14 kDa aproximados. Con estos resultados concluimos que la fracción cromatográfica de 29 kDa sería capaz de discriminar en las especies ovina, porcina y equina, entre aquellos animales sanos, con otras parasitosis y con fasciolosis. Además fue también eficiente para diagnosticar la infección en etapa prepatente en ovinos. Por ello se constituye en una fracción promisoria para ser purificada y empleada en estudios epidemiológicos mediante ELISA
author FREDES,F.
GORMAN,T.
SILVA,M.
ALCAINO,H.
author_facet FREDES,F.
GORMAN,T.
SILVA,M.
ALCAINO,H.
author_sort FREDES,F.
title Evaluación diagnóstica de fracciones cromatográficas de Fasciola hepatica mediante Western Blot y ELISA en animales infectados
title_short Evaluación diagnóstica de fracciones cromatográficas de Fasciola hepatica mediante Western Blot y ELISA en animales infectados
title_full Evaluación diagnóstica de fracciones cromatográficas de Fasciola hepatica mediante Western Blot y ELISA en animales infectados
title_fullStr Evaluación diagnóstica de fracciones cromatográficas de Fasciola hepatica mediante Western Blot y ELISA en animales infectados
title_full_unstemmed Evaluación diagnóstica de fracciones cromatográficas de Fasciola hepatica mediante Western Blot y ELISA en animales infectados
title_sort evaluación diagnóstica de fracciones cromatográficas de fasciola hepatica mediante western blot y elisa en animales infectados
publisher Facultad de Ciencias Veterinarias, Universidad Austral de Chile
publishDate 1997
url http://www.scielo.cl/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S0301-732X1997000200014
work_keys_str_mv AT fredesf evaluaciondiagnosticadefraccionescromatograficasdefasciolahepaticamediantewesternblotyelisaenanimalesinfectados
AT gormant evaluaciondiagnosticadefraccionescromatograficasdefasciolahepaticamediantewesternblotyelisaenanimalesinfectados
AT silvam evaluaciondiagnosticadefraccionescromatograficasdefasciolahepaticamediantewesternblotyelisaenanimalesinfectados
AT alcainoh evaluaciondiagnosticadefraccionescromatograficasdefasciolahepaticamediantewesternblotyelisaenanimalesinfectados
_version_ 1718437770389618688

Ejemplares similares