Detección molecular de Dientamoeba fragilis en heces: eliminación de los inhibidores de la DNA polimerasa

Se realizó un estudio de purificación del DNA de los trofozoitos de Dientamoeba fragilis a partir de muestras fecales humanas congeladas, no fijadas en formol, y con elevadas concentraciones de inhibidores de la DNA polimerasa. Para tal fin, se utilizaron columnas ("spin-columns") disponib...

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Detalles Bibliográficos
Autores principales:	MENGHI,CLAUDIA IRENE, GATTA,CLAUDIA LILIANA, MAKIYA,R, CESAR MÉNDEZ,OSCAR
Lenguaje:	Spanish / Castilian
Publicado:	Sociedad Chilena de Parasitología 2006
Materias:	Dientamoeba fragilis PCR inhibitors DNA purification
Acceso en línea:	http://www.scielo.cl/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S0717-77122006000200008
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spelling	oai:scielo:S0717-771220060002000082007-02-28Detección molecular de Dientamoeba fragilis en heces: eliminación de los inhibidores de la DNA polimerasaMENGHI,CLAUDIA IRENEGATTA,CLAUDIA LILIANAMAKIYA,RCESAR MÉNDEZ,OSCAR Dientamoeba fragilis PCR inhibitors DNA purification Se realizó un estudio de purificación del DNA de los trofozoitos de Dientamoeba fragilis a partir de muestras fecales humanas congeladas, no fijadas en formol, y con elevadas concentraciones de inhibidores de la DNA polimerasa. Para tal fin, se utilizaron columnas ("spin-columns") disponibles en el comercio. Esta metodología se comparó con una técnica tradicional de purificación con fenol/cloroformo. Ambos métodos fueron seguidos de la amplificación del DNA de D. fragilis por una "nested" PCR y posterior electroforesis en un gel de agarosa de los amplicones obtenidos. La extracción del DNA a partir de trofozoitos de D. fragilis - mediante el procedimiento de las columnas - produjo DNA de elevada calidad, libre de impurezas e inhibidores de la polimerasa. Por el contrario, con la técnica de fenol/cloroformo se observó la inhibición de la enzima, cuando se analizaron los productos de amplificación. Además, se confirmó que el agregado de SAF (solución de acetato de sodio - ácido acético - formol) a las muestras fecales afecta la integridad del DNA y como consecuencia impide su posterior amplificacióninfo:eu-repo/semantics/openAccessSociedad Chilena de ParasitologíaParasitología latinoamericana v.61 n.3-4 20062006-12-01text/htmlhttp://www.scielo.cl/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S0717-77122006000200008es10.4067/S0717-77122006000200008
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description	Se realizó un estudio de purificación del DNA de los trofozoitos de Dientamoeba fragilis a partir de muestras fecales humanas congeladas, no fijadas en formol, y con elevadas concentraciones de inhibidores de la DNA polimerasa. Para tal fin, se utilizaron columnas ("spin-columns") disponibles en el comercio. Esta metodología se comparó con una técnica tradicional de purificación con fenol/cloroformo. Ambos métodos fueron seguidos de la amplificación del DNA de D. fragilis por una "nested" PCR y posterior electroforesis en un gel de agarosa de los amplicones obtenidos. La extracción del DNA a partir de trofozoitos de D. fragilis - mediante el procedimiento de las columnas - produjo DNA de elevada calidad, libre de impurezas e inhibidores de la polimerasa. Por el contrario, con la técnica de fenol/cloroformo se observó la inhibición de la enzima, cuando se analizaron los productos de amplificación. Además, se confirmó que el agregado de SAF (solución de acetato de sodio - ácido acético - formol) a las muestras fecales afecta la integridad del DNA y como consecuencia impide su posterior amplificación
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