Reacción en cadena de la polimerasa para la detección de Salmonella sp. en leche en polvo: optimización del método en 12 horas

Los métodos tradicionales para identificar Salmonella sp. se basan en el empleo de medios de cultivo que permiten la recuperación del microorganismo, el aislamiento en medios selectivos, la identificación bioquímica y caracterización serológica. Estos métodos son dispendiosos, tienen baja especifici...

Descripción completa

Guardado en:

Detalles Bibliográficos
Autores principales:	José Villarreal Camacho, Zamira Soto Varela, Nicole Pereira San Andrés, Lourdes Varela Prieto, Rubén Jaramillo Lanchero, Daniel Villanueva Torregroza, Evelyn Mendoza Torres
Formato:	article
Lenguaje:	EN ES
Publicado:	Universidad del Norte 2008
Materias:	salmonella sp leche en polvo pcr diagnóstico molecular diagnóstico microbiológico optimización Medicine R Nursing RT1-120 Public aspects of medicine RA1-1270
Acceso en línea:	https://doaj.org/article/36309056b9144d568f649dc094e9b6ae
Etiquetas:	Agregar Etiqueta Sin Etiquetas, Sea el primero en etiquetar este registro!

id	oai:doaj.org-article:36309056b9144d568f649dc094e9b6ae
record_format	dspace
spelling	oai:doaj.org-article:36309056b9144d568f649dc094e9b6ae2021-12-02T19:28:36ZReacción en cadena de la polimerasa para la detección de Salmonella sp. en leche en polvo: optimización del método en 12 horas0120-55522011-7531https://doaj.org/article/36309056b9144d568f649dc094e9b6ae2008-01-01T00:00:00Zhttp://www.redalyc.org/articulo.oa?id=81711018002https://doaj.org/toc/0120-5552https://doaj.org/toc/2011-7531Los métodos tradicionales para identificar Salmonella sp. se basan en el empleo de medios de cultivo que permiten la recuperación del microorganismo, el aislamiento en medios selectivos, la identificación bioquímica y caracterización serológica. Estos métodos son dispendiosos, tienen baja especificidad, baja sensibilidad y consumen mucho tiempo. El principal objetivo de este trabajo fue estandarizar y optimizar la técnica de PCR para detectar Salmonella sp. en 12 horas, a partir de ADN de cultivos puros y en muestras de leche en polvo, inoculadas intencionalmente con 200, 20 y 2 UFC/mL. Para la extracción del ADN se estudió la conveniencia de fenol:cloroformo:alcohol isoamílico y Chelex® 100. La temperatura de hibridización y las concentraciones de cloruro de magnesio, empleando un diseño factorial incompleto 6x7, permitieron establecer un límite de detección de hasta 10 pg de ADN en cultivos puros de Salmonella typhi. La PCR se basó en la exclusividad de los oligonucleótidos 139-141, los cuales amplificaron una banda de 284 pb para la identificación de género. Los resultados muestran que: (I) la adición de Novobiacina (45 mg/L) o de verde brillante (10 mg/L) como inhibidores de flora acompañante, después de las primeras tres horas del pre-enriquecimiento no selectivo de 6 horas, no influye significativamente en la recuperación de las células bacterianas; (II) obtener biomasa de la primera dilución en base 10 y emplear la técnica de fenol:cloroformo:alcohol isoamílico para la obtención de ADN, se pueden detectar 2 UFC/mL de Salmonella sp. en leche en polvo y que el tiempo de detección se reduce considerablemente.José Villarreal CamachoZamira Soto VarelaNicole Pereira San AndrésLourdes Varela PrietoRubén Jaramillo LancheroDaniel Villanueva TorregrozaEvelyn Mendoza TorresUniversidad del Nortearticlesalmonella spleche en polvopcrdiagnóstico moleculardiagnóstico microbiológicooptimizaciónMedicineRNursingRT1-120Public aspects of medicineRA1-1270ENESSalud Uninorte, Vol 24, Iss 2, Pp 216-225 (2008)
institution	DOAJ
collection	DOAJ
language	EN ES
topic	salmonella sp leche en polvo pcr diagnóstico molecular diagnóstico microbiológico optimización Medicine R Nursing RT1-120 Public aspects of medicine RA1-1270
spellingShingle	salmonella sp leche en polvo pcr diagnóstico molecular diagnóstico microbiológico optimización Medicine R Nursing RT1-120 Public aspects of medicine RA1-1270 José Villarreal Camacho Zamira Soto Varela Nicole Pereira San Andrés Lourdes Varela Prieto Rubén Jaramillo Lanchero Daniel Villanueva Torregroza Evelyn Mendoza Torres Reacción en cadena de la polimerasa para la detección de Salmonella sp. en leche en polvo: optimización del método en 12 horas
description	Los métodos tradicionales para identificar Salmonella sp. se basan en el empleo de medios de cultivo que permiten la recuperación del microorganismo, el aislamiento en medios selectivos, la identificación bioquímica y caracterización serológica. Estos métodos son dispendiosos, tienen baja especificidad, baja sensibilidad y consumen mucho tiempo. El principal objetivo de este trabajo fue estandarizar y optimizar la técnica de PCR para detectar Salmonella sp. en 12 horas, a partir de ADN de cultivos puros y en muestras de leche en polvo, inoculadas intencionalmente con 200, 20 y 2 UFC/mL. Para la extracción del ADN se estudió la conveniencia de fenol:cloroformo:alcohol isoamílico y Chelex® 100. La temperatura de hibridización y las concentraciones de cloruro de magnesio, empleando un diseño factorial incompleto 6x7, permitieron establecer un límite de detección de hasta 10 pg de ADN en cultivos puros de Salmonella typhi. La PCR se basó en la exclusividad de los oligonucleótidos 139-141, los cuales amplificaron una banda de 284 pb para la identificación de género. Los resultados muestran que: (I) la adición de Novobiacina (45 mg/L) o de verde brillante (10 mg/L) como inhibidores de flora acompañante, después de las primeras tres horas del pre-enriquecimiento no selectivo de 6 horas, no influye significativamente en la recuperación de las células bacterianas; (II) obtener biomasa de la primera dilución en base 10 y emplear la técnica de fenol:cloroformo:alcohol isoamílico para la obtención de ADN, se pueden detectar 2 UFC/mL de Salmonella sp. en leche en polvo y que el tiempo de detección se reduce considerablemente.
format	article
author	José Villarreal Camacho Zamira Soto Varela Nicole Pereira San Andrés Lourdes Varela Prieto Rubén Jaramillo Lanchero Daniel Villanueva Torregroza Evelyn Mendoza Torres
author_facet	José Villarreal Camacho Zamira Soto Varela Nicole Pereira San Andrés Lourdes Varela Prieto Rubén Jaramillo Lanchero Daniel Villanueva Torregroza Evelyn Mendoza Torres
author_sort	José Villarreal Camacho
title	Reacción en cadena de la polimerasa para la detección de Salmonella sp. en leche en polvo: optimización del método en 12 horas
title_short	Reacción en cadena de la polimerasa para la detección de Salmonella sp. en leche en polvo: optimización del método en 12 horas
title_full	Reacción en cadena de la polimerasa para la detección de Salmonella sp. en leche en polvo: optimización del método en 12 horas
title_fullStr	Reacción en cadena de la polimerasa para la detección de Salmonella sp. en leche en polvo: optimización del método en 12 horas
title_full_unstemmed	Reacción en cadena de la polimerasa para la detección de Salmonella sp. en leche en polvo: optimización del método en 12 horas
title_sort	reacción en cadena de la polimerasa para la detección de salmonella sp. en leche en polvo: optimización del método en 12 horas
publisher	Universidad del Norte
publishDate	2008
url	https://doaj.org/article/36309056b9144d568f649dc094e9b6ae
work_keys_str_mv	AT josevillarrealcamacho reaccionencadenadelapolimerasaparaladetecciondesalmonellaspenlecheenpolvooptimizaciondelmetodoen12horas AT zamirasotovarela reaccionencadenadelapolimerasaparaladetecciondesalmonellaspenlecheenpolvooptimizaciondelmetodoen12horas AT nicolepereirasanandres reaccionencadenadelapolimerasaparaladetecciondesalmonellaspenlecheenpolvooptimizaciondelmetodoen12horas AT lourdesvarelaprieto reaccionencadenadelapolimerasaparaladetecciondesalmonellaspenlecheenpolvooptimizaciondelmetodoen12horas AT rubenjaramillolanchero reaccionencadenadelapolimerasaparaladetecciondesalmonellaspenlecheenpolvooptimizaciondelmetodoen12horas AT danielvillanuevatorregroza reaccionencadenadelapolimerasaparaladetecciondesalmonellaspenlecheenpolvooptimizaciondelmetodoen12horas AT evelynmendozatorres reaccionencadenadelapolimerasaparaladetecciondesalmonellaspenlecheenpolvooptimizaciondelmetodoen12horas
_version_	1718376488569405440

Reacción en cadena de la polimerasa para la detección de Salmonella sp. en leche en polvo: optimización del método en 12 horas

Ejemplares similares